RT-PCR試劑盒的使用方法及使用注意事項介紹
點擊次數(shù):637 更新時間:2020-07-09
RT-PCR試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被樣本抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。
RT-PCR試劑盒的使用首先應(yīng)平衡至室溫(20-25°C )再試驗( 取出所需反應(yīng)板)
1. 加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品、血清標(biāo)本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物,輕輕混勻30秒(重要),室溫60分鐘。
3. 洗板:甩盡板內(nèi)液體,用蒸餾水或者洗滌液(普通洗滌液,自配)洗滌反應(yīng)板,并去除
水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復(fù)洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫20分鐘。
5. 每孔加入50ul終止液。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。
以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)血清樣品的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
下面要為您介紹的是RT-PCR試劑盒的注意事項:
1、若顯色過淺,可適當(dāng)延長底物溫育時。
2、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
3、凍結(jié)標(biāo)本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
4、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
6、標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
7、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
8、反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。